En estas técnicas se produce una interacción antígeno-anticuerpo primaria. Como la unión de un antígeno a un anticuerpo no es visible a ojo desnudo, se recurre a la marcación (del Ag o del Ac) con otra molécula como un radioisótopo, una enzima catalizadora de una reacción coloreada, o un fluorocromo. Estos marcadores agregan una señal (radiactiva, colorimétrica o fluorescente) a la reacción primaria, que puede ser detectada y cuantificada. La intensidad de esta señal estará en relación directa a la cantidad de Ag-Ac interactuando en la muestra.